





鐵死亡(Ferroptosis)早由哥倫比亞大學(xué)Dr. Brent R.Stockwell在2012年提出,是一種鐵依賴(lài)性的,區(qū)別于細(xì)胞凋亡、細(xì)胞壞死、細(xì)胞自噬的新型的細(xì)胞程序性死亡方式。鐵死亡的的本質(zhì)是谷1胱1甘1肽的耗竭,谷1胱1甘1肽過(guò)氧化物酶(GPX4)活性降低,
脂質(zhì)氧化物不能通過(guò)GPX4催化的谷1胱甘肽還原酶反應(yīng)代謝,之后二價(jià)的鐵離子氧化脂質(zhì)產(chǎn)生活性氧,從而促使鐵死亡的發(fā)生。

外泌體分離提取方案。主要方案包括:
1、差速超1速離心法;
適用于細(xì)胞上清、灌洗液、尿液等大體積的樣品;
2、基于PEG沉淀原理的試劑盒法;
適用于血1清、腦脊液等小體積的樣品;
3、超濾提取法;
適用于細(xì)菌培養(yǎng)液或外泌體含量較低的樣品濃縮。亦可搭配超1速離心法,做進(jìn)一步的提取。
外泌體是細(xì)胞外囊泡的一種,其膜來(lái)源與粒徑范圍與細(xì)胞外囊泡相似,電鏡下,顯示出典型的茶托狀超微結(jié)構(gòu)。實(shí)際操作中,通過(guò)常規(guī)的單一的方法很難鑒定外泌體。鑒定外泌體需要包含形態(tài)、粒徑、表面分子標(biāo)記物等多方面的鑒定。具體方法包括:透射電鏡(形態(tài)鑒定)、NTA檢測(cè)(粒徑及濃度鑒定)、WB(分子標(biāo)志物)。NTA檢測(cè)作為外泌體鑒定的經(jīng)典方法之一,可同時(shí)反映出檢測(cè)樣品的濃度及粒徑。質(zhì)量較好,外泌體miRNA測(cè)序服務(wù),純度較高的外泌體樣品,粒徑分布在30-150nm,原液濃度在10^9左右。為了保證檢測(cè)質(zhì)量,對(duì)每一個(gè)樣品,都會(huì)進(jìn)行3次技術(shù)重復(fù)。檢測(cè)周期為2-3個(gè)工作日,可當(dāng)天到樣當(dāng)天出結(jié)果。


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