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武漢科銳諾生物科技有限公司
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原理
原位雜交技術是在一定的溫度和離子濃度下，使具有特異序列的單鏈探針通過堿基互補規(guī)則與組織細胞內(nèi)待測的核酸復性結合而使得組織細胞中的特異性核酸得到定位，并通過探針上所標記的檢測系統(tǒng)將其在核酸的原有位置上顯示出來。
經(jīng)特定標記的核苷酸鏈為探針，可與組織切片、細胞或染色體標本中的待檢DNA片段或mRNA進行雜交，然后顯示標記物，從而分析待檢核酸的分布和含量。利用此項技術可研究各種基因在染色體上的定位，編碼某種蛋白質(zhì)的mRNA在胞質(zhì)中的表達。
原位雜交天
1. 重新水化和固定
1） 吸取固定好的胚胎，加入50%的PBST溶液，放置5分鐘。
2） 置換成30%的PBST溶液，放置5分鐘
3） 置換成PBST溶液，放置5分鐘，重復一次
4） 置換成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘5） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。
蛋白酶處理與后固定（本實驗不做此步）
1） 用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節(jié)以下的胚胎不處理，5體節(jié)到24小時的胚胎處理3分鐘，24小時以上的胚胎處理5分鐘或者更長。發(fā)育時間越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶處理，發(fā)育時間長的胚胎就需要用蛋白酶來疏松組織，以便于雜交。
2） 用PBST溶液輕洗，在PBST中放置5分鐘。
3） 用4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘，室溫。
4） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。
2. 預雜交
1）每個管中置換成大約300ulHYB－溶液，60℃水浴5分鐘，tunel技術服務，避免振蕩。
2）用等體積的HYB+取代HYB－。
3）60℃水浴，預雜交4小時以上。
3. 雜交
1）吸去預雜交的HYB+，加上100ul已加入探針的HYB+溶液（探針濃度約為1ng/ul）..
2）60℃ 溫浴過夜。注：雜交與預雜交的溫度可以是55到60度不等，溫度越低，探針結合越好，溫度越高，背景越小。
分子病理檢測的意義
精1準醫(yī)學時代的分子l靶向基因檢測
精1準醫(yī)學概念的提出使各醫(yī)學學科在診療方式、治1療手段上都發(fā)生著翻天覆地的變化，但精1準的治1療首先必須依托于精1準的診斷，基因狀態(tài)檢測則是精1準診斷的#步。基因檢測可以診斷疾病，也可以用于疾病風險的預測及指導腫1瘤靶向藥1物治1療?；驒z測是通過組織、血液、體液或細胞對DNA進行檢測的技術，取被檢測者組織細胞，擴增其基因信息后，通過特定設備對被檢測者細胞中的DNA分子信息作檢測，預知身體患疾病的風險，分析它所含有的各種基因情況，從而使人們能了解自己的基因信息。
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第4年
