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武漢貝科新肽科技有限公司
主營：原位雜交,亞細胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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內質網(wǎng)
內質網(wǎng)是細胞中的一個復雜網(wǎng)絡，它負責合成和轉運蛋白質。為了定位內質網(wǎng)，我們可以使用一種名為GFP-HDEL的蛋白質來標記它們。GFP-HDEL是一種帶有綠色熒光的蛋白質，它可以與內質網(wǎng)上的HDEL序列結合。在洋蔥細胞中，逆病毒載體構建，內質網(wǎng)通常位于細胞的中央或周圍。
高爾基體
高爾基體是細胞中的另一個復雜網(wǎng)絡，它負責合成和轉運蛋白質。為了定位高爾基體，我們可以使用一種名為FM4-64的化合物來標記它們。FM4-64可以穿過細胞膜并進入高爾基體，從而發(fā)出紅色熒光。在洋蔥細胞中高爾基體通常位于細胞的中央或周圍。
為什么有的基因定位結果與預想的不一致？
對于一個特定的定位載體，只要熒光表達較好，其定位結果是確定的，不會隨人為意愿或操作而改變。至于有時候和預想的結果不一樣，可能和蛋白本身、選擇的表達載體以及熒光蛋白融合方式等有關。
為什么有的普通定位結果出來后無法準確判斷其定位位置？
細胞中的細胞器復雜且多樣，除一些常見的、特征比較明顯的細胞器外，有些細胞器在激光共聚焦下形狀比較相似，例如：線粒體、過氧化物酶體、高爾基體等細胞器，它們的熒光表達形狀可能都是點狀，因此不易區(qū)分。這時可以結合基因的其他功能研究來判斷其可能表達的位置。另外，蛋白表達本身也是一個復雜的過程，涉及到多個合成場所及轉運過程，自身表達情況可能比較復雜，因此不易判斷具體的表達位置。
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第3年
