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主營：原位雜交,亞細胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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| 先生： |
植物組織原位雜交是一種重要的分子生物學技術，它可以用來研究植物基因的表達和調(diào)控。該技術利用DNA探針與目標組織中的RNA或DNA結合，從而確定目標基因的表達模式和位置。本文將介紹植物組織原位雜交的原理、步驟和應用。
原理
植物組織原位雜交的原理是利用DNA探針與目標組織中的RNA或DNA結合，從而確定目標基因的表達模式和位置。DNA探針是一段已知序列的DNA分子，可以與目標RNA或DNA的互補序列結合。在組織原位雜交中，DNA探針通常標記有熒光染料或性同位素，以便于檢測。
核酸原位雜交可根據(jù)其檢測物而分為細胞內(nèi)原位雜交和組織切片內(nèi)原位雜交；根據(jù)其所用探針及所要檢測核酸的不同又可分為DNA-DNA， RNA-DNA， RNA-RNA雜交。但不論哪種雜交都必須經(jīng)過組織細胞的固定，預雜交，熒光原位雜交技術，雜交，沖等一系列洗步驟及自顯影或酶法顯色以顯示雜交結果。
我們在這兒介紹的是整胚原位雜交，不同于一般的在載片上對細胞和組織切片進行探針雜交及檢測的原位雜交，
以菌落原位雜交為例：對分散在若干個瓊脂平板上的少數(shù)菌落（100-200）進行篩選時，可采用該方法。將這些菌落歸并到一個瓊脂主平板以及已置于第二個瓊脂平板表面的一張纖維素濾膜上。經(jīng)培養(yǎng)一段時間后，對菌落進行原位裂解。主平板應貯存于4℃直至得到篩選結果。
將少數(shù)菌落轉移到纖維素濾膜上
（1） 在含有選擇性的瓊脂平板上放一張纖維素濾膜。
（2） 用無菌牙簽將各個菌落先轉移至濾膜上，再轉移至含有選擇性但未放濾膜的瓊脂主平板上。應按一定的格子進行劃線接種（或打點）。每菌落應分別劃線于兩個平板的相同位置上。后，在濾膜和主平板上同時劃一個含有非重組質(zhì)粒的菌落。
（3） 倒置平板，于37℃培養(yǎng)至劃線的細菌菌落生長到0.5-1.0mm的寬度。
（4） 用已裝防水黑色繪圖墨水的針頭穿透濾膜直至瓊脂，在3個以上的不對稱位置作標記。在主平板大致相同的位置上也作上標記。
（5） 用Parafilm膜封好主平板，倒置貯放于4℃，直至獲得雜交反應的結果。
（6） 裂解細菌，按本段下面所述方法，使釋放的DNA結合于纖維素濾膜。
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第3年
