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武漢科銳諾生物科技有限公司
主營：外泌體,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術(shù)服務(wù)
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外泌體分離提取方案。主要方案包括：
1、差速超1速離心法；
適用于細(xì)胞上清、灌洗液、尿液等大體積的樣品；
2、基于PEG沉淀原理的試劑盒法；
適用于血1清、腦脊液等小體積的樣品；
3、超濾提取法；
適用于細(xì)菌培養(yǎng)液或外泌體含量較低的樣品濃縮。亦可搭配超1速離心法，做進(jìn)一步的提取。
外泌體是細(xì)胞外囊泡的一種，其膜來源與粒徑范圍與細(xì)胞外囊泡相似，胞外囊泡透射電鏡測試服務(wù)，電鏡下，顯示出典型的茶托狀超微結(jié)構(gòu)。實(shí)際操作中，通過常規(guī)的單一的方法很難鑒定外泌體。鑒定外泌體需要包含形態(tài)、粒徑、表面分子標(biāo)記物等多方面的鑒定。具體方法包括：透射電鏡（形態(tài)鑒定）、NTA檢測（粒徑及濃度鑒定）、WB（分子標(biāo)志物）。NTA檢測作為外泌體鑒定的經(jīng)典方法之一，可同時(shí)反映出檢測樣品的濃度及粒徑。質(zhì)量較好，純度較高的外泌體樣品，粒徑分布在30-150nm，原液濃度在10^9左右。為了保證檢測質(zhì)量，對每一個(gè)樣品，都會進(jìn)行3次技術(shù)重復(fù)。檢測周期為2-3個(gè)工作日，可當(dāng)天到樣當(dāng)天出結(jié)果。
外泌體的提取方式：
1、離心法：此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足。
2、過濾離心：這種操作簡單、省時(shí)，不影響外泌體的生物活性，但同樣純度不足。
3、密度梯度離心法：用此種方法分離到的外泌體純度較高，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜
4、免1疫磁珠法：這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡單，但生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性。
5、色譜法：此種方法分離出的外泌體大小均一，但設(shè)備特殊，應(yīng)用不廣泛。
透射電鏡作為鑒定外泌體的金標(biāo)準(zhǔn)，一直是科銳諾生物主營的業(yè)務(wù)之一。透射電鏡點(diǎn)分辨率可以達(dá)到0.1nm，非常適合用來觀察外泌體類囊泡?？蛻糁恍枰乃托迈r或者凍存的外泌體樣品，我們負(fù)責(zé)從制片到觀察的全套檢測服務(wù)。一個(gè)樣品提供2個(gè)放大倍數(shù)，10-15張照片。檢測周期為7個(gè)工作日。
在透射電鏡基礎(chǔ)上，用外泌體標(biāo)記蛋白對外泌體進(jìn)行免1疫標(biāo)記，利用膠體金標(biāo)記出外泌體表面的特定抗原的位置。結(jié)合透射電鏡形態(tài)學(xué)定性的特點(diǎn)，同時(shí)確定外泌體標(biāo)記蛋白的位置。這樣同時(shí)從形態(tài)學(xué)及免1疫學(xué)原理上驗(yàn)證外泌體。這樣數(shù)據(jù)結(jié)果中既可以獲得經(jīng)典形態(tài)的外泌體，又可以定性及定位外泌體表面的標(biāo)志蛋白。這樣具有更充分的說服力。
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第4年
