染色體原位雜交-武漢貝科新肽公司
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武漢貝科新肽科技有限公司
- 主營(yíng)業(yè)務(wù):原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動(dòng)子篩選
- 公司官網(wǎng):bkxtbio.com.cn
- 公司地址:湖北省武漢市洪山區(qū)關(guān)山大道289號(hào)紫菘逸景華庭二期109棟2層2002-3號(hào)
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(夏先生 先生)
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原位雜交技術(shù)(In situ hybridization,ISH)是分子生物學(xué)、組織化學(xué)及細(xì)胞學(xué)相結(jié)合而產(chǎn)生的一門新興技術(shù),始于20世紀(jì)60年代。1969年美國(guó)耶魯大學(xué)的Gall等(1969)首先用爪蟾核糖體基因探針與其卵母細(xì)胞雜交,將該基因進(jìn)行定位,與此同時(shí)Buongiorno—Nardelli和Amaldi等(1970)相繼利用同位素標(biāo)記核酸探針進(jìn)行了細(xì)胞或組織的基因定位,從而創(chuàng)造了原位雜交技術(shù)。自此以后,由于分子生物學(xué)技術(shù)的迅猛發(fā)展,特別是20世紀(jì)70年代末到80年代初,分子、質(zhì)粒和噬菌體DNA的構(gòu)建成功,染色體原位雜交,為原位雜交技術(shù)的發(fā)展奠定了深厚的技術(shù)基礎(chǔ)。

熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,F(xiàn)ISH)是在20世紀(jì)80年代末在性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種非性分子細(xì)胞遺傳技術(shù),以熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)記而形成的一種新的原位雜交方法,探針首先與某種介導(dǎo)分子(reporter molecule)結(jié)合,雜交后再通過(guò)細(xì)胞化學(xué)過(guò)程連接上熒光染料.FISH的基本原理是將DNA(或RNA)探針用特殊的核苷酸分子標(biāo)記,然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上,再用與熒光素分子偶聯(lián)的單與探針?lè)肿犹禺愋越Y(jié)合來(lái)檢測(cè)DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對(duì)定量分析.FISH具有安全、快速、靈敏度高、探針能長(zhǎng)期保存、能同時(shí)顯示多種顏色等優(yōu)點(diǎn),不但能顯示中期分裂相,還能顯示于間期核.同時(shí)在熒光原位雜交基礎(chǔ)上又發(fā)展了多彩色熒光原位雜交技術(shù)和染色質(zhì)纖維熒光原位雜交技術(shù).

和其它實(shí)驗(yàn)方法一樣,必須同時(shí)設(shè)對(duì)照試驗(yàn)以證明其實(shí)驗(yàn)結(jié)果特異性。對(duì)照試驗(yàn)的設(shè)置須根據(jù)核酸探針和靶核苷酸的種類和現(xiàn)有的可能條件去選定。ISHH的優(yōu)點(diǎn)是它的高度特異性,它可測(cè)定組織、培養(yǎng)的單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞提取物中的核苷酸含量。應(yīng)用高敏感度的性標(biāo)記cRNA探針在理想的ISHH的實(shí)驗(yàn)條件下檢測(cè)mRNA,其敏感度可達(dá)到20個(gè)mRNA拷貝/每個(gè)細(xì)胞。由于雙鏈DNA的穩(wěn)定性,在用ISHH定位DNA時(shí)很少發(fā)生丟失,降解,其敏感性高到能夠顯示在染色體鋪片上,有時(shí)甚至在組織切片上的單個(gè)基因拷貝。正因?yàn)槿绱?,?duì)ISHH結(jié)果的解釋應(yīng)持慎重態(tài)度,特別是前人未報(bào)告過(guò)的新發(fā)現(xiàn)。

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